Ensaios microbiológicos para produtos não estéreis

A partir  de 1º de dezembro de 2019 , na Farmacopéia Americana USP 43, foi oficializado a introdução do teste para Burkolderia cepacia complex. (BCC)

Como todos sabemos, os microrganismos resistentes a antibióticos tem se tornado uma procupação global. Estes microrganismos multirresistentes adicionam custos significativos ao sistema de saúde, bem como o custo em vidas humanas.

Recentemente  o Federal Drug Administration dos Estados Unidos da América (FDA) forneceu novas exigências regulatórias  para  a Burkolderia cepacia complex  em razão de inúmeros problemas verificados com produtos farmacêuticos aquosos não estéreis.

Esta exigência requer a realização de um teste para demonstrar a ausência do BCC no produto final e a validação do método de teste de ausência do microrganismo.

O BCC pode sobreviver e multiplicar em uma grande variedade de produtos aquosos não estéreis devido ao fato de que ele é resistente a vários conservantes e agentes antimicrobianos.

De acordo com o FDA os pacientes e consumidores de produtos contaminados com o microrganismo tem um risco aumentado para a infeção  especialmente pacientes com o sistema imunológico comprometido.

O gênero Burkholderia é composto por: bacilos Gram negativos; oxidase e catalase positivos; com uma proporção de G+C que oscila entre 59 e 69,5 %. São bactérias móveis com um flagelo polar único ou com um penacho de flagelos polares de acordo com as espécies. Também são mesófilos e não esporulados. Seu metabolismo é aeróbico. Como sustância de reserva utilizam o polihidroxibutirato.

Ecologicamente são saprófitas que intervêm na reciclagem de matéria orgânica. As bactérias de este gênero podem ser patógenas para os seres humanos e os animais, como Burkholderia mallei agente causal do mormo, ou para as plantas como Burkholderia cepacia, que a sua vez é um patógeno oportunista em enfermos de fibrose cística e apresenta uma grande capacidade degradativa de contaminantes orgânicos.

Existem conhecidos hoje, pelo menos 18 espécies conhecidas de BCC , o habitat principal destes microrganismos é a agua, muito embora tenha sido isolado na água, com capacidade de sobreviver por períodos prolongados em ambientes úmidos , com formação de biofilmes.

O gênero Burkholderia formou-se em 1992, a partir da divisão do gênero Pseudomonas em decorrência da análise dos dados de ARNr. A espécie tipo é B. cepacia, anteriormente denominada Pseudomonas cepacia.

Como os BCCs são tipicamente organismos transmitidos pela água, não é incomum encontrar contaminação por BCC em sistemas de água ou áreas com alto teor de água. Várias empresas diferentes encontraram o BCC em suas instalações e investigaram a fonte dos contaminantes. As fontes de BCC foram encontradas nos seguintes ambientes:

Tanques de armazenamento de água

Em alguns casos, grandes tanques de armazenamento de água são usados ​​como parte do sistema de distribuição de água. Verificou-se que quando os tanques são rotineiramente apenas parcialmente cheios, não é incomum encontrar organismos de biofilme acima da linha de água. Em algumas instalações, o contaminante BCC foi encontrado neste biofilme.

Mangueiras

O uso de mangueiras dos locais de ponto de uso (POU) no sistema de distribuição de água pode ser problemático. É essencial garantir que as mangueiras sejam usadas corretamente para evitar que a água fique na mangueira e desenvolva biofilme. Em um local, as mangueiras foram usadas em uma linha ambiente. A mangueira conectou-se ao ponto de uso e estava pendurada em uma pia. O fundo da mangueira estava assentado na base da pia. O biofilme foi confirmado na mangueira e o BCC foi encontrado no biofilme.

Linhas de distribuição ambiental

Em uma empresa, um loop de distribuição de água ambiente foi usado para transferir a água ambiente para diferentes pontos de uso. Embora o local tivesse uma política de desinfetar a água quente, o método usado foi descrito como desinfetante com água quente sempre que o ponto de uso  não estava em uso. Investigações posteriores mostraram que a higienização não ocorreu a menos que “todos os pontos  na linha não estivessem em uso. Pode levar muitas horas sem que ocorra a higienização. O biofilme foi detectado e continha os organismos BCC.

O capítulo 60 da Farmacopéia Americana  Microbiological Examination of Nonsterile Products – Tests for Burkolderia cepacia complex descrevem o procedimento que permitem a determinação de presença ou ausência do BCC especialmente em produtos aquosos inalatórios , preparações de uso oral, produtos aquosos semissólidos, para oromucosa ou nasal.

A metodologia preconiza que a promoção de crescimento seja realizada com a B.cepacia ATCC 25416  B. cenocepacia ATCC BAA-245, B.multivorans ATCC BAA-247, P. aeruginosa ATCC 9027 e S. aureus ATCC 6538.

O meio de cultura deve ser a Burkolderia cepacia seletive agar.  Caso o laboratório opte pela utilização do meio de cultura formulado deve-se adquirir também o suplemento seletivo contendo polimixina B. Gentamicina e Ticarcilina.

Referências Bibliográficas :

• Farmacopéia dos Estados Unidos da América – USP 43 capítulo 60 Microbiological Examination of Nonsterile Products – Tests for Burkolderia cepacia complex.
• Oxoid Product detail – Dehydrated Culture Media – Burkolderia cepacia agar base.
• Burkolderia cepacia complex case studies ; American Pharmaceutical review ; 2018 – Jeanne Moldenhauer.

*Claudio Kiyoshi Hirai é farmacêutico bioquímico, diretor científico da BCQ consultoria e qualidade, membro da American Society of Microbiology e membro do CTT de microbiologia da Farmacopeia Brasileira. Telefone: 11 5539 6719 E-mail: técnica@bcq.com.br

Artigo disponível na íntegra na seção Microbiologia da Revista Analytica Ed 104.